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高效液相色谱操作步骤

文章出处:扑克王app官网 人气:发表时间:2021-02-04 14:39

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  ? 1.环境污染物分析:大气、水、土壤和食品中的多环芳烃、 多环联苯,阴离子表面活性剂,有机氯农药、有机磷农药, 除草剂,酚类胺类、黄曲霉毒素等污染物的分离与测定。 ? 2.精细化工 :在精细化工生产中使用的具有较高分子量和 较高沸点的有机化合物,如高碳数脂肪族或芳香族的醇、 剂、药物、农药、燃料、炸药等工业产品的醛、酮、醚、 酸、酯等化工原料,以及各种表面活性分离与测定。 ? 3.食品质量分析:农药残留,兽药残留;防腐剂、抗氧化 剂、人工合成色素等食品添加剂的分离与测定,保健食品 中的功效成分检测,真菌毒素分析等 前 后 1、溶剂(流动相) 线、输液系统 (四元泵) 3、手动进样器 4、柱温箱 (色谱柱, 固定相) 5、检测器 高效液相色谱分析仪的 型号、外形因生产厂家 的不同而有较大的差异。 各型号仪器配有相应的 数据处理系统。 6、色谱工作站 ? 1:有机溶剂的过滤(使 用 0.45um的一次性水系 滤膜过滤) ? 2:流动相超声脱气 (10~30min) 滤膜 开关 ? 1:样品过滤(过滤装置: 一次型注射器;一次性滤 头)进入高效液相色谱仪 样品液都必须经过样品过 滤装置过滤 ? 2:把经过称量、定容、超声 处理后的样品溶液,用一 次性注射器和一次性滤头 过滤后,加入2ml具塞试管 中备用。 一次性滤头:由机系、水系组成; 滤膜的孔径为0.45um 将色谱柱按流动相流动 方向即色谱柱标示箭头 方向安装在仪器上 色谱是一种分离分 析手段,分离是核 心,因此担负分离 作用的色谱柱是色 谱系统的心脏。对 色谱柱的要求是柱 效高、选择性好, 分析速度快等。 拧紧色谱柱的接口 ? 1:将储存流动相的贮液 瓶放置于贮液瓶架上 ? 2:更换仪器泵头里清洗 瓶中的超纯水(以确保 仪器外回路系统清洁和 良好的工作状态) 清洗瓶 ? 依次打开: 稳压器 柱温箱 高压泵 检测器 计算机电源开关 ? 1:拧松泵右侧的快速排气 阀(两圈即可) 快速排气阀 2:按下泵前面的“排气”键 排气5min后拧紧快速排气阀 ? 3:进入色谱工作站,待仪 器自检完成后进行进样系 统的清洗 4:用一次性平 头微量注射器 吸入1~2ml的样 品溶液,注入 手动进样阀的 进样口 一次性平头 微量注射器 色谱工作站 排气 ? 作用:平衡活化色谱柱并清除管路中的杂质和残留的水分。 ? 步骤:分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路20min~30min 如果流动相为有机相和纯水相的混合液,在用甲醇或 乙腈冲洗流路后,按照分析样本的需要调节比例阀的比例, 冲洗流路约20min; 如果流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他 电解质,则应该用与分析样品流动相中缓冲盐溶液或有机酸、 无机酸、其他电解质与有机相相同比例的水加有机相冲洗流 路约20min以上,再按照分析样品的需要调节有机相与缓冲溶 液等的比例冲洗流路约20min,平衡进样环境。 ? 简而言之:根据流动相的不同选择不同的溶液冲洗流路。 ? 具体问题具体分析! ? 1:设置程序文件(流动相 通道、流速、比例、检测 器检测波长、分析时间、 最高压力、最低压力) ? 2:设定分析方法的方法文 件(文件名称,表示浓度 的单位) ? 3:设定样品分析表(标准 名称、测定次数、样品名 称、编号) ? 4:待进样环境平衡后,打开 检测器的氘灯,检测器开始 自检和教正,进行基线检测, 待基线平稳后进样分析。 打开检测器的氘灯 简而言之:软件的各种设置;繁杂但不复杂 ? 1:启动设置程序文件、 ? 2:顺时针旋转六通阀, 设定分析方法的方法文件、 仪器开始进行分析 设定样品分析表按照样品 分析表的顺序,用平头微 顺时针旋转 量注射器将经过0.45um滤 膜过滤的标准溶液和样品 溶液逐次注入六通进样阀 中, ? 1:根据样品的出峰时间定性 ? 2:根据样品的峰面定量 (在一定的色谱操作条件下,流入检测器的待测组分的 含量、质量或浓度与检测器的响应信号:峰面积或峰 高成正比。) 色 谱 图 示 例 ? 1:冲洗流路和色谱柱 ? a:若流动相为有机相和超纯水的混合溶剂,则直接用甲 醇或乙腈冲洗流路约30min,待基线无杂质峰出现走平稳 后可停泵关机。 ? b:若流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他电 解质溶,则先用5%甲醇冲洗流路30~60min,其次用50%甲 醇溶液冲洗流路约30min,再用甲醇或乙腈冲洗流路约 30min,待基线无杂质峰出现走平稳后可停泵关机。 ? 2:冲洗进样系统 ? a:清洗手动进样阀,将手动进样阀的扳手逆时针扳到头, 用一次性平头微量注射器吸入2~4ml的50%甲醇,注入手 动阀的进样口。 ? b:每次样品测定完后,一定要用50%甲醇清洗;若样品 水系,则先用超纯水清洗,再用50%甲醇清洗。 ? 依次关闭检测器的氘灯 ? 将高压泵的流速降为“0” ? 关闭检测器开关 ? 关闭高压泵开关 ? 关闭仪器色谱工作站 ? 关闭检测器电源开关 ? 关闭高压泵电源开关 ? 关闭柱温箱电源开关 ? 关闭电脑开关 ? 关闭稳压电源开关 ? 并在仪器使用登记本上记录环境温度、湿度、仪器工作状态及 使用情况 ? 结束操作,整理实验台 ? 流动相 : 1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水,酸 碱液及缓冲液需经过滤后使用,过滤时注意区分水系 膜和油系膜的使用范围; 2、 水相流动相需经常更换(一般不超过2天),防止 长菌变质; ? 1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书,注意适用 范围,如pH值范围、流动相类型等; 2、 使用符合要求的流动相; 3、 使用保护柱; 4、 如所用流动相为含盐流动相,反相色谱柱使用后, 先用水或低浓度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲 醇冲洗。 5、 色谱柱在不使用时,应用甲醇冲洗,取下后紧密 封闭两端保存; 6、 不要高压冲洗柱子; 7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱; ? 1、 采用过滤或离心方法处理样品,确保样品中不含 固体颗粒; 2、 用流动相或比流动相弱(若为反相柱,则极性比 流动相大;若为正相柱,则极性比流动相小)的溶剂 制备样品溶液,尽量用流动相制备样品液; 3、手动进样时,进样量尽量小,使用定量管定量时, 进样体积应为定量管的3~5倍; ?That’s all ! Thank you !

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